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如何利用CRISPR进行基因敲除(三)如何合成gRNA作者:基因编辑 gRNA合成本教程是系列文章“如何使用 CRISPR 创建基因敲除”中的第三部分。 为了编辑细胞的基因组,您需要同时将导向 RNA(gRNA)和 RNA 指导的 DNA 切割酶 Cas9 共表达到细胞中。 在本课程之前,美格君和大家一起讨论了如何选择**的 CRISPR/Cas9蛋白 以及如何优化 gRNA 的设计。 在本部分,我们将讨论如何合成将在细胞中表达以创建基因敲除的 gRNA。 图1. gRNA合成方法 本教程讨论了两种合成 gRNA 的方法,并分析了它们各自的优缺点。此外,还提供了每种方法的简要实验方案。下面是对这两种方法的总结: 方法 1:将 gRNA 克隆到质粒中(见图1)优点
缺点
提示
协议
接下来
方法 2:体外转录 gRNA(见图1)优点
缺点
协议
接下来
总结现在您已经了解了将 gRNA 合成为质粒(方法1)或 mRNA(方法 2)的优缺点。我们总结了一些常见细胞系的研究人员尝试过的 gRNA 形式和递送方法。插入缺失频率(indel 频率)可以作为 gRNA 和 CRISPR/Cas9 递送效率的一个参考指标。 合成 gRNA 之后,就该将 gRNA 和 CRISPR/Cas9 递送到您的细胞中了! 在接下来的文章中,我们将讨论如何将 gRNA 和 Cas9蛋白 递送到细胞中。 相关阅读
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