如何进行快速恒温扩增？

RDA快速恒温扩增技术原理

RDA, Recombinase Depend Amplification,   是以重组酶介导的快速等温扩增技术。

RDA 反应所需要的关键酶是能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶（KX）、DNA 单链结合蛋白（SSB）和链置换DNA 聚合酶（Bsu）。 RDA反应具体过程为：

a.   首先，针对目标DNA片段设计一对正向和反向引物，重组酶KX与引物结合形成复合物，该复合物在双链DNA 模板中寻找靶位点；

b.   一旦找到靶位点，复合物在模板上定位后可直接引发链交换反应形成D 状环，SSB 随即结合被置换的DNA单链，形成D－Loop 结构；

c.   重组酶－引物复合物主动水解体系中的ATP 导致复合物构象改变而解离，重组酶解离后引物3'端暴露并被Bsu识别，Bsu按照模板序列在引物3'端添加相应碱基，DNA扩增反应启动；

d. Bsu在延伸引物的同时，继续解开模板的双螺旋DNA结构，DNA 合成过程继续进行；

e. 正反向两条引物扩增完成即形成一个完整的扩增子。在合成过程中，母板双链始终是分开的，正向和反向引物让链的合成从两个方向同时进行。该循环反复扩增进行，并最终导致要扩增的双链DNA的指数增加。

跟其他等温核酸扩增技术以及PCR技术相比，RDA恒温扩增技术主要表出以下5个优势：

（1）RDA 技术拥有快速的反应效率，样本与试剂一接触便开始反应，不需要进行DNA 双链的变性裂解，在20 min 内得到检测结果；

（2）RDA 反应在恒温下即可进行（37～42℃），不需要热循环仪进行核酸扩增，所需设备简单、经济；

（3）RDA 技术可检测RNA、miRNA、ssDNA 以及dsDNA 样本，检测范围较广泛

（4）RDA 检测试剂盒操作简单，不需要复杂的技术培训；

（5）RDA检测形式多样，可开发成为便携式核酸检测体系，用于现场快速检测。

利用RDA可以开发出低成本、高效、精准的POCT分子检测。RDA快速等温扩增技术有着巨大的发展前景。

在检测新冠状病毒COVID-19病毒的实验中，RDA检测到病毒的时间可以缩短到10分钟以内，灵敏度可以检测到少于10个拷贝的病毒，灵敏度达到临床的要求。

RDA、PCR、LAMP三种DNA片段体外恒温扩增技术比较

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