美格生物是Magigen T7核酸内切酶I产品专业生产厂家，可以提供OEM服务，咨询热线：18027152056
【 产品编号】C007M
【 产品名称】Magigen T7核酸内切酶I / T7 Endonuclease I 蛋白
【 预期用途 】本产品用于基于基因编辑技术平台的相关研究
【 包装规格】1250U
【 产品内容 】
| 产品组成 | C007M |
| 10×T7 Endonuclease I Reaction Buffer | 1 ml×1 支 |
| Magigen T7 Endonuclease I 蛋白（10U/µl） | 125 µl |
【 产品概述 】
T7核酸内切酶I 识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holiday 结构或 DNA分叉点、异源性 DNA；同时能以缓慢的速度切割带有切刻缺口的双链 DNA。该酶切割错配位点 5’端的**、第二或第三个磷酸二酯键。本产品可用于基因突变、SNP、TALEN 或CRISPR/Cas9 形成的突变体检测，识别错配 DNA，分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA；检测异源性二聚体或切刻 DNA；用于随机切割线性 DNA 进行 Shot-gun 克隆等。
【 活性定义 】
在 50 µl 反应体系，37℃条件下，1 小时将 90%以上的 1µg 超螺旋十字型结构的 pUC（AT）* 转化成 90%以上的线性结构所需要的酶量定义为一个活性单位。
【储存条件及有效期】
本产品于-20℃密封保存，有效期 12 个月。
【 使用方法 】
1. PCR 扩增带有错配位点的 DNA 片段
1.1 PCR 反应使用以下两个模板进行：
来自靶向细胞的 gDNA（如 Cas9 或 TALEN 转染细胞）；
来自阴性对照细胞的 gDNA（例如非特异性 DNA 转染细胞）；
以 100 ng 转染后的细胞基因组 DNA 为模板，建议扩增片段长度为 1kb 左右。设计引物时, 使突变位点不要在片段中间。
1.2 使用商业试剂盒或其他方法纯化 PCR 产物，同时准确定量。 *1
2. T7核酸内切酶I / T7 Endonuclease I 酶切反应
2.1 根据下表配置反应体系：
| PCR Products | 200 ng |
| 10×reaction buffer | 2 µL |
| Nuclease-free Water | To 19 µL |
2.2 根据下述条件对 PCR 产物进行退火：
| 初始变性 | 95°C | 5min |
| 退火 | 95-85°C | -2°C/s |
| 85-25°C | -0.1°C/s |
| 4℃ | ∞ |
2.3 在退火产物中加入 1µl T7 Endonuclease I，37℃孵育 15min。
2.4 将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。 *2
1. 如无需计算突变率，仅进行突变检测，PCR 产物可直接进行退火，如果未进行纯化或提取，建议直接加入酶切反应中的
PCR 产物体积不超过 5µL；
2. 反应结束后如需长期保存产物，需加入终浓度 20mM EDTA 终止反应，室温存放 30min 后，会开始出现非特异切割现象。
备注：
T7核酸内切酶I / T7 Endonuclease I 是一种底物结构选择性的酶，该酶针对不同的 DNA 底物展现出不同的切割活性。因此，切割特定底物时，必须摸索并控制好酶的用量和反应时间：
反应温度超过 42℃，反应时间超过 30min，酶量使用过大均会出现非特异核酸酶的活性；
反应温度超过 55℃，酶活显著下降。
Magigen Magicscript T7核酸内切酶购买指南
1. T7核酸内切酶价格
T7核酸内切酶I价格会随外汇汇率的波动而变化，请以实际价格为准。
2. T7核酸内切酶I运输
T7产品价格是产品含税价格。没有包含运费等其他费用。有些产品需要采用干冰运 输方式，请在购买前咨询运费、是否支持干冰运输等事宜。
3. T7核酸内切酶图片仅供参考，请以实际为准。
美格生物是T7核酸内切酶专业生产厂家, T7核酸内切酶购买咨询热线：18027152056
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