LAMP扩增技术、CAS蛋白、Taq酶、逆转录酶、RNase HII、基因分型检测

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CRISPR Cas蛋白系统是细菌和古细菌在长期进化形成的一种免疫防御系统,可用来对抗入侵的病毒或者外源DNA。目前,发现的CRISPR CAS系统根据不同的识别和切割的分子机制被分为了3大类,主要包括单一Cas蛋白、多cas蛋白相互作用、靶向DNA或者RNA等。第1类CRISPR系统需要单一Cas蛋白,包括第II、V、VI型Cas蛋白。而第2类利用多种Cas蛋白,包括第I、III、IV型C...

热敏UDG酶的来源热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白,又称南极热敏UDG。该UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶,产生的缺嘧啶位点,在高温或高 pH 下,极易水解断裂。该酶对RNA无活性,主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热,经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基...

什么是BioID邻近蛋白标记技术构建全面的蛋白质相互作用图谱是理解细胞功能的关键。一个特别的挑战是建立图谱不仅考虑到直接的二元蛋白质-蛋白质相互作用,而且还包括间接相互作用的信息(例如,在不直接相互作用的蛋白质之间,但它们都是同一多蛋白复合物的组成部分),以及邻近蛋白质网络。蛋白质相互作用的发现方法还需要考虑许多细胞过程中的动态性质,克服弱蛋白质-蛋白质相互作用带来的技术挑战。利用修饰酶进行...

什么是逆转录PCR?逆转录PCR, 又称反转录PCR,英文Reverse Transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应PCR的一种变形。注意:实时PCR的简称也是RT-PCR, 注意区别。本文所指的RT-PCR是逆转录PCR.在逆转录RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。逆转录PCR(RT-PCR)的原理逆转录PC...

UDG酶与UNG酶有什么不同?在PCR扩增反应中人们经常用UDG酶或者UNG酶来预防污染。许多人经常问UDG酶与UNG酶的区别?为什么一些主混合物包含UNG和其他主混合物包含UDG?为了回答这个问题,美格君首先需要让大家明白,这两者都是用来防止PCR反应的污染情况的,实际目的没有区别。UDG酶,尿嘧啶DNA糖苷酶,是一种进化的、保存完好的DNA修复酶。UDG酶是一个由六个亚家族组成的超级酶家...

UDG酶,英文名称Uracil - DNA Glycocasylase,别名是尿嘧啶-DNA糖基化酶,是人体内的一种酶。UDG酶可自动检验碱基对排列的对错,可以抓取DNA分子链中的碱基对,并用特定形状的“口袋”来进行检查,如果碱基对排列形状正确,则将其放回原来的位置,如果碱基对形状有误,则将其清除,DNA分子链中留下的空白位置会由其他修复机制来修补。Magigen UDG酶用途因PCR扩展技...

逆转录酶又叫做反转录酶,依赖RNA的DNA聚合酶,是一种多功能酶,它有哪些活性和作用呢?逆转录酶的活性和作用:1、具有DNA聚合酶活性,可以RNA为模板,催化脱氧核糖核苷三磷酸聚合成DNA的过程。2、具有DNA指导的DNA聚合酶活性,以反转录合成的第一条DNA单链为模板,以脱氧核糖核苷三磷酸为底物,再合成第二条DNA分子3、具有酶催化消化信使RNA的能力。相关阅读Magigen逆转录酶/反转...

基因是什么?基因, 英文Gene,是具有遗传效应的DNA分子片段,是DNA分子上有遗传效应的特定核苷酸序列的总称。基因是遗传变异主要物质,她储存着生命从孕育、生长、凋亡过程的全部信息,通过复制、转录、表达,完成细胞分裂、蛋白质合成等重要生理过程。基因结构是怎样的?Magigen准备从DNA、preRNA、mRNA这三个方面来分析基因的结构:图1. 基因结构图一、DNA基因结构主要是由编码区和...

什么是蛋白质邻近连接分析?邻近连接分析,英文Proximity ligation assay,简称PLA, 中文翻译为邻位连接分析或者邻近连接分析技术。邻近连接分析PLA是一种特殊的免疫分析方法,可用于检测目标蛋白,蛋白相互作用等等。邻近连接分析PLA由Fredriksson等人于2002年开发。到目前为止,它已成为一种成熟且普遍适用的免疫组化工具,用于高级和精确的蛋白质分析。图1.   A...

RNase HII是什么酶?RNase HII, 中文名:核糖核酸酶HII,是2型核糖核酸酶H。RNase HII的作用RNaseHII酶通过切割核糖核苷酸DNA 5'端, 将RNA从RNA-DNA杂交体中裂解。核糖核酸酶HII具有连接核糖核酸酶活性,在RNA-DNA连接处最后一个核糖核酸肽的5'端切割RNA-DNADNA和RNA-DNARNA双链体。要从从DNA中去除错误结合的核糖,RNa...

核酸内切酶RNase H1 / 核糖核酸酶H1RNase H1酶在底物中需要至少四个含有碱基对的核糖核苷酸,并且不能从由脱氧核糖核苷酸组成的链中去除单个核糖核苷酸。因此,在DNA复制过程中,RNase H1酶不参与冈崎片段RNA引物的处理。RNase H1在单细胞生物中不是必需的;在大肠杆菌中,RNase H1敲除得到温度敏感表型,在酿酒酵母,在应激反应中它们产生缺陷。在包括哺乳动物在内的许...

什么是rhPCR?rhPCR, 英文名RNaseH-dependent PCR,中文名称核糖核酸酶H依赖性PCR。rhPCR是对标准PCR技术的改进。在rhPCR中,引物的3'端设计有一个可移动的扩增区。带阻断引物的扩增依赖于耐高温RNase HII酶在与互补靶序列杂交期间的裂解活性。这种核糖核酸酶RNase HII具有一些有用的特性,可以增强PCR。首先,它在低温下几乎没有酶活性,可以在不...

前言快速准确地诊断疾病是有效治疗和进行长期预防的关键。基于核酸的与疾病相关的生物标志物对于来说诊断是必不可少的,因为DNA或RNA可以从微量样本中扩增出来,这使得它们能够通过互补核苷酸配对进行高度特异性的检测。核酸诊断已经成为各种急慢性疾病的金标准,特别是那些传染病。在传染病爆发期间,正如最近经历的2019年冠状病毒病COVID-19大流行一样,快速准确的核酸检测对有效控制疾病至关重要。核酸...

什么是RNase H?RNase H, 英文名称Ribonuclease H,中文名称核糖核酸酶H,是一个非序列特异性内切酶家族,又称核酸内切酶RNase H。RNaseH通过水解机制催化RNA/DNA底物中RNA的切割。从细菌到古细菌到真核生物, 核糖核酸酶H家族的成员几乎可以在所有生物中找到。RNase H分类和命名法RNase H家族被分为进化相关的组,大致分为RNase H1和RNa...

美格生物最近推出的恒温扩增技术产品LAMP试剂盒 2×LAMP Amplification Mix ‍ ‍‍是全新一代LAMP扩增技术产品。什么是LAMP扩增技术?LAMP恒温扩增技术的英文名称是:Loop-mediated isothermal amplification, LAMP, 中文名称是:环介导等温扩增反应。LAMP技术的历史LAMP技术是日本学者Notomi在2000年发明的,...

在上一期的文章里,北京理工大学生命学院黄潮勇博士给大家介绍了几种基于CRISPR Cas9技术和同源重组技术的大肠杆菌基因组编辑方法和CRISPR Cas9基因编辑原理 (点击阅读),相信对大家有所帮助。黄潮勇博士做了一些大肠杆菌基因组编辑...

CRISPR Cas9基因编辑是目前流行的基因编辑技术。但是如何把CRISPR Cas9基因编辑方法讲清楚,却不是那么容易的事情。北京理工大学生命学院黄潮勇博士对CRISPR Cas9基因编辑技术进行了深入的研究。今天美格君邀请了黄潮勇博士,就CRISPR Cas9基因编辑技术为大家做一个全面、详细的介绍。大家也可以关注黄潮勇博士的个人微信公众号:[ My BioWorld ],阅读其他相关...

逆转录酶的定义逆转录酶,英文名:Reverse transcriptase,又称反转录酶,RT酶,是RNA定向DNA聚合酶,是一种由逆转录病毒遗传物质编码的酶,对逆转录病毒RNA(核糖核酸)转录成DNA(脱氧核糖核酸)进行催化。这种催化转录是正常细胞将DNA转录成RNA的逆过程,因此被称为逆转录酶和逆转录病毒。逆转录酶是逆转录病毒感染属性的核心,其中一些会导致人类疾病,包括导致获得性免疫缺陷...

如何改造Taq酶?Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌Thermus aquaticus YT1株分离提取的。YT是一种嗜热真菌,能在70~75℃生长。该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离的。该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白分子为 94KDa.Taq DNA聚合酶的改造Taq DNA聚合酶发现了几十年,在分子生物学领域具有广泛的应用。研究人员对其不断的...

如何进行RT-PCR实验?今天美格君邀请了Jones博士就这个议题,与大家一起探讨。一、本次RT-PCR实验目的学习和掌握逆转录、RT-PCR基因扩增技术和操作方法,并深刻理解逆转录、RT-PCR基因扩增技术在功能基因克隆与载体构建过程中的重要性。二、RT-PCR实验试剂和材料大肠杆菌DH5a、Trizol试剂、逆转录试剂、PCR相关试剂、PCR产物克隆试剂、氯仿、异丙醇、DEPC水等。三、...

Taq DNA 聚合酶的历史1976年, 科学家A. Chien从美国黄石国家森林公园的火山温泉中一种叫做水生栖热菌(Thermus aquaticus,英文缩写Taq)的嗜热细菌中分离出一种耐热的 DNA聚合酶。这种嗜热细菌生长在70-75℃极富矿物质的高温环境中。因此,Taq DNA聚合酶具有极高的热稳定性,能够承受PCR的热变性步骤。1986年,Kary Mullis发明了PCR技术,...

广州美格生物提供全系列的CRISPR Cas蛋白,用于基因编辑、快速检测。想了解详情,请点击:CRISPR Cas蛋白CRISPR Cas13a的发现历史2016年9月,美国加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna、Alexandra East-Seletsky和他们的同事们利用CRISPR Cas13蛋白的附带切割活性检测RNA。2017年4月,布罗德研究所大牛张锋团队利用CRI...

广州美格生物提供全系列的CRISPR Cas蛋白,用于基因编辑、快速检测。想了解详情,请点击:CRISPR Cas蛋白CRISPR SpCas9蛋白是基因组编辑中最流行的Cas蛋白,但是科学家一直在发掘新的CRISPR Cas蛋白。CRISPR Cas14蛋白和CasΦ蛋白系列的发现为CRISPR基因编辑提供了更多的可能。目前用于CRISPR基因组编辑的CRIPSR Cas9蛋白SpCas9...

摘要 Bst DNA聚合酶大片段是一种常用的DNA聚合酶,具有高保真、耐高温等独特的特点,能引发链置换反应,是一种重要的DNA多重置换扩增酶。 实验目的设计一种成本低、产量高、扩增活性高的Bst DNA聚合酶大片段表达体系; 探究该Bst酶应用于胃癌石蜡包埋组织基因组DNA扩增条件。 实验方法采用pTWIN1质粒作为载体克隆表达Bst DNA聚合酶大片段,应用几丁质亲和层析柱纯化该酶,使用该...

CRISPR-Cas系统使用RNA引导的Cas蛋白,其大尺寸大约是950到1400个氨基酸,是其特定DNA或RNA靶向活性所必需的。
Jennifer A. Doudna提出了一套来自未培养的古细菌的CRISPR-Cas系统,其中包含Cas14,一个非常紧凑的RNA引导核酸酶家族(400到700个氨基酸)。
尽管Cas14蛋白的体积很小,但它们能

广州美格生物提供全系列的CRISPR Cas蛋白,用于基因编辑、快速检测。想了解详情,请点击:CRISPR Cas蛋白‍CRISPR Cas14是一个非常紧凑的RNA引导核酸酶家族。尽管CRISPR Cas14蛋白的体积很小,但它们能够靶向单链DNA(ssDNA)进行切割而不需要限制性的序列要求。此外,CRISPR-Cas14蛋白对靶点的识别触发了单链dna分子的非特异性切割,这种活性可以实...

什么是端粒?端粒,英文名称Telomere, 这一术语由美国二十世纪早期的遗传学家Hermann J. Muller创造,它由来自希腊文字中表示“ 末尾”的词telos 和表示“部分” 的词 meros构成。端粒是存在于细胞内染色体末端的一段具有特殊序列的DNA与蛋白质结合的复合体,端粒短重复序列与端粒结合蛋白一起构成了特殊的“帽子”结构,用于保持染色体的完整性和控制细胞分裂周期。人类细胞的...

大家好,前面我们讲了CRISPR CAS12a切割原理的第一部分,现在我们继续讲CAS12a切割原理的第二部分。CRISPR Cas切割原理二图A. AsCas12a结构域。在域下面标识的数字是每个域的最后一个残基位置。尽管研究表明,最好的方式是比较两种核酸酶的DNA监测,但与CRISPR Cas9相反,Cas12a RNP似乎在其对原型间隔区的查询期间,采用间歇性接触方式跟踪DNA。CRI...

大家好,我是托马斯,应美格君的邀请,今天想讲一下crispr cas12a的切割原理。CRISPR Cas12a在最近的快速检测应用中崭露头角。那么crispr cas12a是怎样工作的呢?CRISPR Cas12a切割原理大家都已经非常熟悉crispr Cas9这个强大的基因组编辑工具,但其除了crispr cas9这个基因编辑工具以外,还有一些非常出色的Cas核酸酶编辑工具。V型cris...

RT一般有两种含义:1,最常用的意思:RT,reverse transcription,英文"逆转录"的缩写 2,现在也有人这么解释:RT,RealTime, 英文"实时"的缩写。这里我们要讲的是逆转录RT-PCR技术。逆转录RT-PCR原理什么是逆转录RT-PCR技术?RT- PCR,英文名为 Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,...

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