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什么是热失活?酶热失活温度大全

作者:酶丽生活

酶的活性

酶热失活

什么是热失活?

热失活,英文是Heat inactivation,也叫热灭活,是一种化学现象,特别是在蛋白质和酶的领域中较为常见。它指的是蛋白质或酶在高温条件下失去其活性或功能的过程。这

种失活通常发生在蛋白质或酶的最适反应温度以上。


热失活是停止限制性核酸内切酶反应的便捷方法。例如,在65°C下孵育20分钟,可以使大多数**孵育温度为37°C的限制性核酸内切酶失活。在65°C下不能失活的酶通常可以通过在80°C下孵育20分钟而失活。下表显示了酶是否可以被热灭活以及所需的温度。


对于在65°C或80°C下无法热失活的酶,我们建议使用色谱柱进行清除(例如Monarch®PCR&DNA清除试剂盒),或在琼脂糖凝胶上进行反应,然后提取DNA(建议使用Monarch凝胶提取试剂盒),或进行苯酚/氯仿提取。


下面是一个类似热灭活的典型实验案例。

将含有适当NEBuffer,0.5µg小牛胸腺DNA和5或10µl限制性核酸内切酶的50µl反应混合物在37°C孵育60分钟,然后在65°C或80°C孵育20分钟。将0.5µg底物DNA(通常为λ)添加到反应混合物中,并在酶的**反应温度下孵育60分钟。

利用琼脂糖凝胶电泳观察,如果第二次孵育后底物DNA出现任何的消化(包括完全或部分),均可以认为是不完全热灭活。



酶一般在什么温度下失活?



酶的失活温度和时间大全

酶的名称热失活温度热失活所需时间
AatII80°C20 minutes
Acc65I65°C20 minutes
AccI80°C20 minutes
AciI65°C20 minutes
AclINo--
AcuI65°C20 minutes
AfeI65°C20 minutes
AflII65°C20 minutes
AflIII80°C20 minutes
AgeI65°C20 minutes
AhdI65°C20 minutes
AleI80°C20 minutes
AleI-v265°C20 minutes
AluI80°C20 minutes
AlwINo--
AlwNI80°C20 minutes
ApaI65°C20 minutes
ApaLINo--
ApeKINo--
ApoI80°C20 minutes
AscI80°C20 minutes
AseI65°C20 minutes
AsiSI80°C20 minutes
AvaI80°C20 minutes
AvaII80°C20 minutes
AvrIINo--
BaeGI80°C20 minutes
BaeI65°C20 minutes
BamHINo--
BamHINo--
BanI65°C20 minutes
BanII80°C20 minutes
BbsI65°C20 minutes
BbsI65°C20 minutes
BbvCINo--
BbvI65°C20 minutes
BccI65°C20 minutes
BceAI65°C20 minutes
BcgI65°C20 minutes
BciVI80°C20 minutes
BclINo--
BclI65°C20 minutes
BcoDINo--
BfaI80°C20 minutes
BfuAI65°C20 minutes
BfuCI80°C20 minutes
BglI65°C20 minutes
BglIINo--
BlpINo--
BmgBI65°C20 minutes
BmrI65°C20 minutes
BmtI65°C20 minutes
BpmI65°C20 minutes
Bpu10I80°C20 minutes
BpuEI65°C20 minutes
BsaAINo--
BsaBI80°C20 minutes
BsaHI80°C20 minutes
BsaI65°C20 minutes
BsaIv280°C20 minutes
BsaJI80°C20 minutes
BsaWI80°C20 minutes
BsaXINo--
BseRI80°C20 minutes
BseYI80°C20 minutes
BsgI65°C20 minutes
BsiEINo--
BsiHKAINo--
BsiWI80°C20 minutes
BsiWI80°C20 minutes
BslINo--
BsmAINo--
BsmBI-v280°C20 minutes
BsmFI80°C20 minutes
BsmI80°C20 minutes
BsoBI80°C20 minutes
Bsp1286I65°C20 minutes
BspCNI80°C20 minutes
BspDI80°C20 minutes
BspEI80°C20 minutes
BspHI80°C20 minutes
BspMI65°C20 minutes
BspQI80°C20 minutes
BsrBI80°C20 minutes
BsrDI80°C20 minutes
BsrFINo--
BsrFI-v2No--
BsrGI80°C20 minutes
BsrI80°C20 minutes
BssHII65°C20 minutes
BssKI80°C20 minutes
BssSI80°C20 minutes
BssSI-v2No--
BstAPI80°C20 minutes
BstBINo--
BstEIINo--
BstNINo--
BstUINo--
BstXI80°C20 minutes
BstYINo--
BstZ17INo--
BstZ17INo--
Bsu36I80°C20 minutes
BtgI80°C20 minutes
BtgZI80°C20 minutes
BtsCI80°C20 minutes
BtsI80°C20 minutes
BtsI-v2No--
BtsIMutI80°C20 minutes
Cac8I65°C20 minutes
ClaI65°C20 minutes
CspCI65°C20 minutes
CviKI-1No--
CviQINo--
DdeI65°C20 minutes
DpnI80°C20 minutes
DpnII65°C20 minutes
DraI65°C20 minutes
DraIII65°C20 minutes
DraIIINo--
DrdI65°C20 minutes
EaeI65°C20 minutes
EagI65°C20 minutes
EarI65°C20 minutes
EciI65°C20 minutes
Eco53kI65°C20 minutes
EcoNI65°C20 minutes
EcoO109I65°C20 minutes
EcoP15I65°C20 minutes
EcoRI65°C20 minutes
EcoRI65°C20 minutes
EcoRV80°C20 minutes
EcoRV65°C20 minutes
Esp3I65°C20 minutes
FatI80°C20 minutes
FauI65°C20 minutes
Fnu4HINo--
FokI65°C20 minutes
FseI65°C20 minutes
FspINo--
HaeII80°C20 minutes
HaeIII80°C20 minutes
HgaI65°C20 minutes
HhaI65°C20 minutes
HinP1I65°C20 minutes
HincII65°C20 minutes
HindIII80°C20 minutes
HindIII80°C20 minutes
HinfI80°C20 minutes
HpaINo--
HpaII80°C20 minutes
HphI65°C20 minutes
Hpy166II65°C20 minutes
Hpy188I65°C20 minutes
Hpy188III65°C20 minutes
Hpy99I65°C20 minutes
HpyAV65°C20 minutes
HpyCH4III65°C20 minutes
HpyCH4IV65°C20 minutes
HpyCH4V65°C20 minutes
I-CeuI65°C20 minutes
I-SceI65°C20 minutes
KasI65°C20 minutes
KpnINo--
MboI65°C20 minutes
MboII65°C20 minutes
MfeINo--
MluCINo--
MluINo--
MlyI65°C20 minutes
MmeI65°C20 minutes
MnlI65°C20 minutes
MscI80°C20 minutes
MseI65°C20 minutes
MslI80°C20 minutes
MspA1I65°C20 minutes
MspINo--
MspJI65°C20 minutes
MwoINo--
NaeINo--
NarI65°C20 minutes
Nb.BbvCI80°C20 minutes
Nb.BsmI80°C20 minutes
Nb.BsrDI80°C20 minutes
Nb.BssSINo--
Nb.BtsI80°C20 minutes
NciINo--
NcoI80°C20 minutes
NcoI80°C20 minutes
NdeI65°C20 minutes
NgoMIVNo--
NheI80°C20 minutes
NlaIII65°C20 minutes
NlaIV65°C20 minutes
NmeAIII65°C20 minutes
NotI65°C20 minutes
NotI65°C20 minutes
NruINo--
NsiI65°C20 minutes
NsiI80°C20 minutes
NspI65°C20 minutes
Nt.AlwI80°C20 minutes
Nt.BbvCI80°C20 minutes
Nt.BsmAI65°C20 minutes
Nt.BspQI80°C20 minutes
Nt.BstNBI80°C20 minutes
Nt.CviPII65°C20 minutes
PI-PspINo--
PI-SceI65°C20 minutes
PacI65°C20 minutes
PaeR7INo--
PaqCI65°C20 minutes
PciI80°C20 minutes
PflFI65°C20 minutes
PflMI65°C20 minutes
PhoINo--
PleI65°C20 minutes
PluTI65°C20 minutes
PmeI65°C20 minutes
PmlI65°C20 minutes
PpuMINo--
PshAI65°C20 minutes
PsiI65°C20 minutes
PsiI-v265°C20 minutes
PspGINo--
PspOMI65°C20 minutes
PspXINo--
PstI80°C20 minutes
PstINo--
PvuINo--
PvuIINo--
PvuIINo--
RsaINo--
RsrII65°C20 minutes
SacI65°C20 minutes
SacII65°C20 minutes
SalI65°C20 minutes
SalI65°C20 minutes
SapI65°C20 minutes
Sau3AI65°C20 minutes
Sau96I65°C20 minutes
SbfI80°C20 minutes
ScaI80°C20 minutes
ScaI80°C20 minutes
ScrFI65°C20 minutes
SexAI65°C20 minutes
SfaNI65°C20 minutes
SfcI65°C20 minutes
SfiINo--
SfoINo--
SgrAI65°C20 minutes
SmaI65°C20 minutes
SmlINo--
SnaBI80°C20 minutes
SpeI80°C20 minutes
SphI65°C20 minutes
SphI65°C20 minutes
SrfI65°C20 minutes
SspI65°C20 minutes
StuINo--
StyD4I65°C20 minutes
StyI65°C20 minutes
SwaI65°C20 minutes
TaqI-v2No--
TfiINo--
TliINo--
TseINo--
Tsp45INo--
Tsp509INo--
TspMINo--
TspRINo--
Tth111INo--
WarmStart80°C20 minutes
XbaI65°C20 minutes
XcmI65°C20 minutes
XhoI65°C20 minutes
XmaI65°C20 minutes
XmnI65°C20 minutes
ZraI80°C20 minutes

表1. 酶的失活温度和时间     (美格生物)


扩展阅读

如何找到**的PCR反应体系?PCR技术所需要的酶和原料的调整

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