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不用双链DNA切割,配对的单链Nicking可以触发无缝基因组编辑

作者:Manuel A. F. V. Gonçalves

精准的基因组编辑涉及 donor DNA与染色体序列的同源重组,通过可编程核酸,打断染色体序列双链DNA。

理想情况下,基因组编辑应该是有效的,明确的,精准的。然而,除了构成潜在的易位起始损伤外,双链DNA断裂(靶向或其他)大多是通过不可预知和突变的非同源重组过程修复的。

在这里,我们发现,以CRISPR-Cas9部件为基础,利用RNA引导核酸酶,针对供体质粒和染色体靶位点,配对的单链DNA的协同形式断裂、或Nicking切刻,会触发无缝同源定向基因,目标针对人类细胞中大的遗传负载,包括多能干细胞。

重要的是,除了大幅降低基因组修改过程中的突变性,这经配对切刻的策略实现了复用,单步,基因打靶,

跟标准的双链DNA断裂法相比,获得精确编辑细胞的频率更高。


Nicking: 指将双链DNA中的一条切开,而另一条保持完整.


阅读原文

https://www.nature.com/articles/s41467-017-00687-1


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