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不用双链DNA切割,配对的单链Nicking可以触发无缝基因组编辑作者:Manuel A. F. V. Gonçalves 精准的基因组编辑涉及 donor DNA与染色体序列的同源重组,通过可编程核酸,打断染色体序列双链DNA。 理想情况下,基因组编辑应该是有效的,明确的,精准的。然而,除了构成潜在的易位起始损伤外,双链DNA断裂(靶向或其他)大多是通过不可预知和突变的非同源重组过程修复的。 在这里,我们发现,以CRISPR-Cas9部件为基础,利用RNA引导核酸酶,针对供体质粒和染色体靶位点,配对的单链DNA的协同形式断裂、或Nicking切刻,会触发无缝同源定向基因,目标针对人类细胞中大的遗传负载,包括多能干细胞。 重要的是,除了大幅降低基因组修改过程中的突变性,这经配对切刻的策略实现了复用,单步,基因打靶, 跟标准的双链DNA断裂法相比,获得精确编辑细胞的频率更高。 Nicking: 指将双链DNA中的一条链切开,而另一条保持完整. 阅读原文 https://www.nature.com/articles/s41467-017-00687-1 相关阅读 Magigen T7核酸内切酶I / T7 Endonuclease I Magigen耐高温RNase HII-核糖核酸酶 - rhPCR好帮手! Magigen Bst DNA聚合酶 - 与环介导恒温扩增LAMP技术完美结合 Magigen LAMP试剂盒 - 环介导恒温扩增技术典范 Magigen一步法RT-qPCR预混液试剂盒-轻松搞定反转录qPCR |