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用融合向导RNA操控基因编辑CRISPR –CAS系统是基因工程的有力工具。最近，除了Cas蛋白质工程，向导RNA也在改进，有助于拓宽CRISPR–Cas9系统研究领域。 Yongsub Kim等人组成的团队开发了一个融合向导RNA（fgRNA），与Cas9和CPF1蛋白一起作用，在人类细胞中诱导突变。 研究发现，fgRNA可以用于多路基因组编辑，和用两种CAS蛋白进行正交基因组操控。研究结果表明，fgRNA可以作为一种工具，用于执行多个基因操作。 Cas9和CPF1蛋白质有不同的特点，有不同的gRNA结构。出于这个原因，有必要让gRNA相互独立，即使他们识别相同的目标序列。 这就是为什么没有尝试使用这两种不同类型的CAS蛋白的正交性，尽管它们可能是互补的，因为它们的不同特性。 在这项研究中，该团队开发和验证了fgRNA--新的gRNA结构，可以与Cas9蛋白和CPF1一起工作。此外，通过扩展fgRNA目标序列， 他们发现，利用Cas9和CPF1蛋白，fgRNA可用于靶向两个独立的内源性位置。也证明了fgRNA可同时诱导基因中断和活化。 有了这个概念，各种各样的应用都将成为可能。例如，如果对fgRNA进行设计，指导cas9针对DNA修复机制的关键因素进行变异，将CPF1导向想要靶向的基因，它有可能改变CPF1突变频率或模式。对fgRNA本身，fgRNA结合上述CAS工程蛋白和改进的gRNAs技术, 将产生各种可能的应用。 总之，利用各种CAS蛋白，fgRNA有能力简化多基因操控，扩大基因组编辑工具在生物学研究中的应用。
返回首页 参考文献 Fusion guide RNAs for orthogonal gene manipulation with Cas9 and Cpf1 Jiyeon Kweon,An-Hee Jang,Da-Eun Kim,Jin Wook Yang,Mijung Yoon,Ha Rim Shin,Jin-Soo Kim&Yongsub Kim 相关阅读 |
