|
载体构建什么是载体构建? 载体构建主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造。 载体构建完成后可利用PCR原理进行测序验证。 载体构建的步骤:1. 通过PCR扩增目的基因片段 PCR要设计引物,设计引物时要选择合适的同源序列,根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点,PCR的产物要纯化。 2. 酶切 根据引物设计的酶切位点,分别对PCR产物和质粒载体进行酶切,酶切后的产物也要进行回收 3. 连接 通过连接酶将酶切后的PCR产物和质粒载体进行连接 4. 转化 将连接产物转化到受体菌中(一般为DH5a),涂板,培养过夜 5. 挑取单克隆,并鉴定 挑去平板上的单克隆培养,可以通过PCR或者酶切初步鉴定阳性克隆,对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序 返回首页 相关阅读 Magigen T7核酸内切酶I / T7 Endonuclease I Magigen耐高温RNase HII-核糖核酸酶 - rhPCR好帮手! Magigen Bst DNA聚合酶 - 与环介导恒温扩增LAMP技术完美结合 Magigen LAMP试剂盒 - 环介导恒温扩增技术典范 Magigen一步法RT-qPCR预混液试剂盒-轻松搞定反转录qPCR
文章分类:
载体
|