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美格生物UDG酶在PCR反应中的作用

作者:Magigen

UDG酶,英文名称Uracil - DNA Glycocasylase,别名是尿嘧啶-DNA糖基化酶,是人体内的一种酶。

UDG酶可自动检验碱基对排列的对错,可以抓取DNA分子链中的碱基对,并用特定形状的“口袋”来进行检查,如果碱基对排列形状正确,则将其放回原来的位置,如果碱基对形状有误,则将其清除,DNA分子链中留下的空白位置会由其他修复机制来修补。


Magigen UDG酶用途

因PCR扩展技术是一种非常敏感的扩增技术,容易受到污染的影响,少量的外源DNA污染可以与目的模板一块被扩增。当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时,会发生共同来源的污染,这就是所说的残余污染;从其他样品中克隆的DNA或者纯化的DNA也会是污染源。根据卫生部的规定,凡是用于临床检验的PCR试剂,都应该采用UDG/UNG酶技术,以防止污染。


控制污染的方法主要有两种:

1 、在PCR实验过程中,使用良好的实验步骤和实验环境,减少残余污染:使用抗气雾剂移液管的阻止气雾剂进入移液管内;为PCR样品配制、以及扩增后分析设计隔离的区域;在准备新的反应前,需要更换手套;总是使用不含有模板的阴性对照来检测污染;使用预先混合的反应成分,而不是每个反应的每个试剂单独加入。

• 使用UDG酶,这种酶也称为尿嘧啶 -N- 糖基化酶,UNG酶,移除DNA中的尿嘧啶,在PCR扩展反应液配制时,将dTTP和dUTP按一定的比例混用,使得扩增产物含有脱氧尿嘧啶,这种产物对 UNG 敏感,所有可以在PCR前对新配制的反应用 UNG 处理以破坏残余产物,杜绝污染。


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