美格生物CRISPR基因编辑技术快讯 第三期

用于一管法新冠检测耐热Cas13酶的特性

耐热Cas13同源物将扩大和解锁CRISPR系统在合成生物学和生物技术应用中的贡献。本文从Thermoclostridium caenicola中鉴定并表征了一种耐热Cas13同源物(TccCas13a)，该同源物在37 - 70°C的广泛温度范围内表现出良好的顺式和反式切割活性。为了证明耐热Cas13酶在生物技术应用中的实用性，文章将RT-LAMP等温扩增与TccCas13a结合，开发了一种用于病毒检测的一管法检测方法。此检测方法具有现场即时检测(POC)特征，使其能够用于检测不同的病原体，适用于多重检测。

来源：Proc Natl Acad Sci U S A

https://doi.org/10.1073/pnas.2118260119

VIR-CRISPR：用于即时检测SARS-CoV-2的可视化单管超快RT-PCR和CRISPR方法

科学家提出了一种称为 VIR-CRISPR 的超灵敏、即时和可视化检测方法，用于SARS-CoV-2检测。这项技术涉及磁珠富集核酸、RT-PCR扩增、CRISPR-Cas12a介导反式切割和荧光信号检测。此方法将所有组件集中在单管中，几乎在单个分子水平上就具有较高的特异性和灵敏度。通过验证，此方法在40个临床样本的阳性检出率为100%，与标准RT-PCR一致，这对病毒即时检测和下一代分子诊断提供了广阔的前景。

来源：Analytica Chimica Acta   

https://doi.org/10.1016/j.aca.2022.339937   

利用高保真CRISPR-Cas12酶检测COVID-19变异株

本文开发并验证了一种快速的COVID-19变异株检测方法，结合LAMP等温扩增技术和CRISPR-Cas12识别SARS-CoV-2 spike (S)基因单核苷酸多态性(SNP)突变。采用SARS-CoV-2全基因组测序和/或实时RT-PCR作为检测对照，对261份临床样本进行SNP鉴定，SNP符合率为97.3%，一致性为98.9%(261份中258份)。文章还发现，检测单个E484A突变足以准确地从其他主要流行变异中识别出Omicron。这些发现表明，对比临床和公共卫生实验室所进行的SARS-CoV-2变异株鉴别测序，基于CRISPR方法学的检测是一种更快、更简单的诊断方法。

来源：Journal of Clinical Microbiology

https://doi.org/10.1128/jcm.00261-22  

利用等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a快速多重检测SARS-CoV-2

新冠病毒检测多依赖于RT-qPCR，但是该检测时间周期长（~24小时），易被污染，需要专业设备和人员；本文将RT-LAMP等温扩增技术和CRISPR/Cas12a相结合，克服了这些障碍，快速（~40分钟），高灵敏，即时检测，并使用dUTP/UDG防止残留污染。对25例阳性（Ct<35）和50例阴性患者样本检测，实现了100%的特异性和93%的灵敏度；检测限3拷贝数/μL，这些是迈向全民检测的重要一步。

来源：Research Square

https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-1730849/v1