免疫细胞治疗的理论和方法

免疫细胞治疗

肿瘤治疗手段的发展经历了从手到术放疗、化疗，再到现在的生物治疗。

而肿瘤的生物治疗又分为以下几种方法:

1. 暂免疫因子

2. 重组抗体

3. 基因疗法

4. 细胞治疗

今天我们就谈一下细胞治疗。

• 细胞免疫理论的建立

肿瘤免疫理论的提出

肿瘤免疫的概念起源于上世纪初。1909年Ehrich首先提出，免疫系统不仅负责防御微生物侵犯，而且能从机体内清除改变了的宿主成分。并提出了细胞免疫直接对抗肿瘤的概念。此后，人们认识到癌细胞是改变了的宿主成分。

免疫监视学说的提出

上世纪六十年代，经Thomas、Buret和Good等人将该观点系统化，提出了免疫监视学说。

免疫监视学说的中心思想是:

免疫系统具有一个十分完备的监视功能，能准确地分辨“自己”和“非己”的成分;它不仅能清除外界侵入的各种微生物，排斥同种异体移植物，而且还能消灭机体内突变的细胞，防止肿瘤的生长，保护机体的健康。每当免疫监视功能由于这种或那种原因被消弱时，便为肿瘤的发生提供了有利条件; 如果机体不具备免疫监视功能，人类的肿瘤发病率会大大的提高。

• 免疫细胞治疗

细胞治疗的技术特点

图1. 细胞治疗的技术

• 肿瘤体细胞免疫治疗技术

向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤细胞或激发机体抗肿瘤免疫反应，从而达到治疗肿瘤的目的，这一过程称为体细胞免疫治疗。

大量研究表明，肿瘤患者的外周血中存在癌细胞，是引发肿瘤复发转移、导致患者死亡的重要原因之一。有效清除血循环中的癌细胞，对预防肿瘤复发、改善肿瘤晚期患者的生存质量具有重要的作用。

自体体细胞医疗技术的概念

自体体细胞治疗技术是应用病人自体的体细胞，通过体外培养，获得免疫活性细胞，作为治疗手段的医疗技术。

• 免疫细胞治疗技术有哪些？

免疫细胞治疗主要技术

• 细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced kier cel, CIK)

1. 1991年发现，以共同表达CD3和CD56为特征;

2. 增值速度快。经过2-3周左右的体外培养，细胞数量可增加400倍以上，占总细胞的 比例可达40%以上。

3. 杀瘤活性高: 杀伤单位(TLU)为LAK细胞的73倍以上。

4. 杀瘤谱广:CIK细胞虽然以CD3、CD56细胞为主要效应细胞，却没有T淋巴细胞杀伤时的MHC限制性。

5. 体外培养依赖CD3单抗和IFN-YVCD3单抗可作为丝裂原活性单位与T细胞表面的 CD3交联，诱导其活化，而IFN-则诱导I-1等细胞因子的合成。

• 树突状细胞(dendritic cell,Dc)是最有效的抗原递呈细胞。DC的目标在于诱导肿瘤特 异性和长期持久的免疫反应，这种效应有助于防止微小残密病灶和肿瘤复发。

• LAK/TILCD3AKICTL:自上世纪80年代以来先后应用于临床的自体免疫细胞，但由于存在着扩增倍速较低,细胞来源困难、细胞毒力不高等诸多问题，该疗法在临床应用上受到一定限制。

• 经基因改变的自体T细胞:自体T细胞体外经慢病毒转染表达识别CD19的嵌合受体，该受体识别表达CD19的CLL肿瘤细胞后杀伤肿瘤细胞，这一基因改变的细胞在回输 后在体内增值1000倍以上。

免疫细胞治疗的适用范围

优势

• 可以调节和增强全身免疫机能;

• 可有效的杀伤残余的肿瘤细胞防止肿瘤复发、转移;

• 缓解晚期患者的临床症状，延长生存期，创造更多的治疗机会，甚至实现长期带瘤生存;

• 减轻放、化疗的毒副反应，提高患者生存质量;

• 它特异性极强、无免疫排斥反应，相对于其他三种治疗模式副作用小。

适应症

• 减少恶性肿瘤传统治疗后的复发与转移;

• 提高肿瘤综合治疗疗效;

• 少数肿瘤及患者的主要治疗手段 (对放化疗不敏感或者无法耐受的情况以及对免疫原性较强的的肿瘤)。

禁忌症

• 孕妇;

• 患者不能进行淋巴细胞分离术或者少量多次抽血者;

• 器官功能衰竭者;

• 有器官移植史的患者;

• 不可控制的感染性疾病，如HIV阳性;

• 有其它免疫缺陷疾病，在4周内使用过大量免疫 抑制剂的患者;

• 对本治疗中所用生物试剂过敏者;T淋巴细胞瘤患者。

• 免疫细胞治疗

图2.   免疫细胞治疗的基本流程

• 免疫细胞治疗的基本流程

1. 采血

2. 单个核细胞采集

3. 细胞分离、扩增

4. 细胞鉴定及无菌检测

5. 细胞回输

6.疗效观察

• 目前开展的免疫细胞治疗项目有哪些？

1. NK：自然杀伤细胞治疗

2. CIK：细胞因子诱导的杀伤细胞治疗

3. CIK+DC：CIK细胞+树突细胞治疗

4. TIL：肿瘤浸润性淋巴细胞(来自于肿瘤组织、胸水、腹水和转移淋巴结)治疗

5. TIL+ DC-肿瘤组织

6. DC-肿瘤组织+T细胞治疗

7. AAIC：抗原活化的树突状细胞治疗

8. EAAL：治疗肿瘤和慢性传染性病毒感染

CIK细胞免疫治疗流程

1. 采取50ml外周血

2. 提取单个核细胞

3.   添加INF-y、IL-2、CD3诱导

4. 细胞培养达1x10⁹以上

5. 质控检测

6. 细胞回输，6个疗程或结合放疗、化疗制定方案

CIK细胞制备培养方法

1. 用血细胞分离机获得80ML浓缩血

2. 留血浆50ML备用

3. 以2000g离心20min，温度20℃

4. 分离出富含白细胞的部分

5. 加淋巴细胞分离液，离心，分离出PBMC层

6.   用175cm²培养瓶 CIK培养液(含IFN-y)

7. 第2天加混合细胞因子

8. 第3天扩瓶培养

9.   CIK培养,隔2~3天补液扩瓶

10. 第7天扩瓶后抽样送检(细菌培养和表型分析)

11. 培养瓶内细胞收集、离心、洗涤回输

DC-CIK细胞免疫治疗流程

图3. DC-CIK细胞免疫治疗

树突状细胞制备流程

图4.   树突状细胞制备流程

肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)治疗流程

1. 提取肿瘤组织、肿瘤浸润的淋巴结、癌性胸水/腹水

2.   体外获取特异性淋巴细胞

3. 细胞培养达1x10⁹以上

4. 质控检测

5. 细胞回输，6个疗程或结合放化疗制定方案

经修饰的自体T淋巴细胞(DC+T)免疫治疗流程

图5. 经修饰的自体T淋巴细胞(DC+T)免疫治疗

细胞免疫治疗的临床观察指标

1. 生活质量改善

2. 免疫功能检测

3. 不良反应

4. 客观疗效评估

近期疗效:

①. 靶病灶大小的变化:

按照 RECIST1.1版评定肿瘤近期疗效，即以治疗前后影像学检查为依据进行评价，分为完全缓解(CR)、部分缓 解(PR)、病灶稳定(SD)和进展(PD)

②. 疾病控制率(DCR):

CR+PR+SD

反应率(RR):CR+PR

远期疗效:

无病生存时间(DFS)

无进展生存时间(PFS)

总生存(OS)

国外临床应用报告(以CIK治疗为例)

德国波恩大学权威专家施密特教授于2011年2月在国际肿瘤专业**杂志《J Cancer Res Clin Oncol》发布发布了关于CIK临床应用的最 新总结报告，文章题目和摘要如下:

Hontscha C, Borck Y, Zhou H, Messmer D, Schmidt-Wolf lG. Clinical trials on Clk cels. first report of theinternational registny on ClK cells (lRCc).JCancer Res Clin Oncol. 2011;137(2):305-10.

在867例临床比对研究中426例各肿实体瘤的各个不同阶段的病人接受了CIK治疗，各例病人输入的CIK细胞数 2.19x10⁸~5.2x10¹⁰范围，

在可观察统计的381例中结果为:

24例完全缓解(CR);27例部分缓解(PR);40例好转(MR);161例稳定(SD);129例进展(PD)。但病人生存质量有显著提高，而且CIK治疗副作用轻微。其中还发现肝病毒负荷减轻。

国内临床应用报告(以CIK治疗为例)

据报道，CIK治疗256例中晚期各种实体瘤，无CR, PR+MR为80%207例)，随访1年生存期为96%, 2年为 92%, 3年为88%。生存质量卡氏评分提高率为88%(平均15分); 并且治疗后检测患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值显著提高、免疫力明显增强。

癌症治疗手段的复发转移比率

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