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如何培养动物细胞?动物细胞培养的条件和方法作者：动物细胞培养 动物细胞培养细胞工程是利用细胞生物学和分子生物学的方法， 通过某些工程学手段， 在细胞水平或细胞器水平上， 按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质，或获得细胞产品的一门综合性科学技术。 根据操作对象的不同， 可分为植物细胞工程和动物细胞工程两大领域。 细胞培养是细胞工程中最基础的技术。 什么是动物细胞培养？动物细胞培养是细胞工程中最基础的技术。它是把动物机体的某一组织或器官取出， 分散成单个细胞，使其在人工培养条件下继续生存、 生长、甚至增殖的过程。 随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现衰老和死亡的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因为遗传物质发生改变而变成永生化细胞，该种细胞的黏着性降低，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量减少。这通常发生在体外长期培养的细胞系中，永生化细胞由于获得了无限增殖的能力，因此在科学研究和工业生产中有广泛的应用。然而，这种变化也可能与肿瘤细胞的特征相类似，因为肿瘤细胞也常常表现出无限增殖和黏附性减弱的特点。 在细胞培养过程中，通常在低温（通常是液氮温度，约-196°C）或超低温（-80°C）条件下保存细胞。因为在这样的低温条件下，细胞中酶的活性降低，细胞新陈代谢的速率减缓，这有助于长时间保持细胞的活性和遗传稳定性，直到它们被复苏用于进一步的实验或培养。这种保存方法被称为细胞冻存。 动物细胞培养流程动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞， 然后， 放在适宜的培养基中， 让这些细胞生长和增殖。 • 选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、 器官，它们细胞增殖能力强， 分裂旺盛， 分化程度低， 容易培养。 • 分散成单个细胞 在进行动物细胞培养时，细胞间的物质主要是蛋白质，用胰蛋白酶分散细胞。 动物细胞培养适宜的PH为7.2 - 7.4, 此环境下胃蛋白酶（2.0） 没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高 。
图1. 动物细胞培养过程示意图 1、提取动物胚胎或幼龄动物的组织、 器官，动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质， 将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织 2、剪碎组织， 3、去掉组织间蛋白，贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，分解弹性纤维，分散成单个细胞 4、加培养液，制成细胞悬浮液，转入培养液中进行传代培养 5、无限传代 动物细胞培养不能最终培养成生物体 动物细胞生长特性：1、细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、 无毒、 易于贴附。 2、细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时， 细胞就会停止分裂增殖， 这种现象称为细胞的接触抑制。 如何区分原代培养和传代培养？如何区分细胞株和细胞系？原代培养和传代培养的区别，细胞株和细胞系的区别，见图2 原代培养： 从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。 培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养： 将原代细胞从培养瓶中取出， 配制成细胞悬浮液， 分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养， 称为传代培养。 细胞株： 原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞， 大部分细胞衰老死亡， 少数细胞存活到40~50代， 这种传代细胞为细胞株。 细胞系： 细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态， 只有部分细胞由于遗传物质的改变， 使其在培养条件下可以无限制传代， 这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变， 具有癌细胞的特点， 失去接触抑制，容易传代培养。
图2. 原代培养和传代培养的区别，细胞株和细胞系的区别 动物细胞培养的条件1、 无菌、 无毒的环境，添加一定量的抗生素， 定期更换培养液； 2、 营养物质，如葡萄糖、 氨基酸、 无机盐、 维生素、 核苷酸、 动物血清等，补充合成培养基中缺乏的物质，保证细胞顺利的生长增殖； 3、 温度和PH：36.5 ± 0.5 度 ； PH为7. 2-7. 4。 4、 气体环境：O2 和CO2 ，95%空气维持细胞呼吸，5% CO2维持pH值。 动物细胞培养技术的应用（1） 生产蛋白质生物制品： 病毒疫苗、 干扰素、 单克隆抗体等。 （2） 获得大量自身的皮肤细胞， 用于植皮。 （3） 用于检测有毒物质 （4） 用于生理、 病理、 药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 动物细胞培养知识检测1、 在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（ ） A． 细胞系 B．细胞株 C． 原代细胞 D． 传代细胞 2、 动物细胞工程技术的基础是 ----- （ ） A. 动物细胞融合 B. 单克隆抗体 C. 胚胎移植 D. 动物细胞培养 3. 为了使用于培养的动物组织细胞分散开以便配制成一定浓度的细胞悬浮液， 选取来的动物组织应选用下列哪种物质处理（ ） A. 胃蛋白酶 B. 胰蛋白酶 C. 盐酸 D. 胰脂肪酶 4． 用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织， 其主要原因是这样的组织细胞 （ ） A. 容易产生各种变异 B． 具有更强的全能性 C. 取材十分方便 D． 分裂增殖的能力强 5、 下图是动物细胞培养的基本过程示意图。 请据此图回答 (1) 容器A中放置的是动物器官或组织。 它一般取自___________。 (2) 容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是__________， 然后用__________酶处理， 这是为了使细胞分散开来。 这样做的目的是_______________. (3) 培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有____________________等。 在此瓶中培养一段时间后， 一般传到第____ 代， 有许多细胞衰老死亡， 到这时的培养称为___________. (4) 为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中， 用_______________处理， 然后配置成___________， 再分装。 (5) 在C瓶中正常培养了一段时间后， 发现细胞全部死亡。 原因是_________________________。 6、在动物细胞培养过程中， 当贴壁细胞分裂生长到细胞表面_______________ 时， 细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的_______________ 。 要使贴壁细胞从瓶壁上分离下来， 需要用酶处理， 可用的酶是_______________ 。 7、随细胞传代次数的增多， 绝大部分细胞分裂停止， 进而出现__________ 的现象； 但极少数细胞可以连续增殖， 其中有些细胞会因遗传物质发生改变面变成___________ 细胞， 该种细胞的黏着性_____________ ， 细胞膜表面蛋白质（糖蛋白） 的量_______________ 。 8、在细胞培养过程中， 通常在______________ 条件下保存细胞。 因为在这种条件下， 细胞中_______________ 的活性降低， 细胞_______________ 的速率降低。 9、给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后， 发生了排斥现象， 这是因为机体把移植的皮肤组织当作______________ 进行攻击。 10、在动物细胞工程中， 常常需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对动物组织进行处理， 使之分散成单个细胞以制成细胞悬液。 这类酶是作用于蛋白质的哪一结构 （ ） A． NH－CH2 B． NH2 －CO－ C． －CO－NH－ D． －NH－COOH 11、关于动物细胞培养的有关叙述， 正确的是 （ ） A. 细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中 B. 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、 氨基酸、无机盐、 生长素和动物血清等 C. 动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌蛋白 D. 动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理 12、下列有关动物细胞培养的叙述， 正确的有？ ① 动物细胞培养的原理是动物细胞的全能性 ②需要对细胞进行一次脱分化处理和两次蛋白酶处理 ③原代培养的细胞是指贴壁生长到发生接触抑制之前 的细胞 ④恒温条件下细胞周期持续时间长短不随细胞培养进程而改变 ⑤传代培养过程的细胞因为以有丝分裂方式增殖， 所以在传代过程中其遗传物质保持不变 ⑥只要培养条件适宜， 细胞都可在体外无限繁殖 ⑦可用于检测有毒物质、 构建人造皮肤、 大量生产药物蛋白 ⑧为防止培养过程中微生物污染， 应将培养箱抽成真空并消毒灭菌 13、在动物细胞培养过程中， 当贴壁细胞分裂生长到细胞表面__________ 时， 细胞会停止分裂增殖， 这种现象称为细胞的__________ 。 此时， 瓶壁上形成的细胞层数是 。 要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来， 需要用酶处理， 可用的酶是__________ 。 参考答案： 1. A 2. D 3. B 4. D 5.1 幼龄动物的器官或组织、 动物胚胎 5.2 剪碎, 胰蛋白, 使每个细胞能与培养液接触 5.3 葡萄糖、 氨基酸、 无机盐、 维生素和动物血清, 10, 原代培养 5.4 胰蛋白酶， 细胞悬浮液 5.5 细胞没有发生瘤变 6. 完全被细胞覆盖， 接触抑制，胰蛋白酶 7. 衰老和死亡， 永生化， 降低， 减少 8. 参考前文 magigen.com 9. 异物或非己成分 10. C 11. D 12. 13. 相互接触，接触抑制，单层（或一层），胰蛋白酶 讨论： 1、 动物细胞培养的原理是什么？ 2、 从动物机体中要取出哪些相关组织？ 并解释原因。 3、 组织分散成单个细胞的方法是什么？其理论依据是什么？ 4、 动物细胞体外培养需要满足哪些条件？
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