CRISPR Cas蛋白家族十分庞大，目前发现和使用的主要有CRISPR Cas9、Cas12、Cas13、Cas14系列。其中，又可以分为多种亚型，例如Cas12a、Cas12b、Cas12f、Cas12i等等。CRISPR Cas9、Cas12a、Cas12b、Cas13、Cas14蛋白之间有什么不同、区别？我们先将这些常用Cas蛋白的主要特点进行比较Crispr蛋白向导RNAPAMTa...

近年来，包括信使RNA（mRNA）、小干扰RNA（siRNA）和微小RNA（miRNA）在内的核糖核酸（RNA）治疗已经迅速发展为现代医学的一个新支柱。其中，基于mRNA制备而成的新冠疫苗更是在抗击引起严重急性呼吸道综合症的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）方面发挥了巨大作用，其超快的序列设计速度和易于大规模生产的特性为应对紧急和不断变化的医疗危机提供了新的可能。在如今mRNA药物获得成功...

一、CRISPR体外诊断技术概况1、CRISPR技术的定义CRISPR的全称是Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats（成簇的规律间隔的短回文重复序列），Cas的全称则是CRISPR associated（CRISPR关联），合在一起简称为CRISPR/Cas系统。Cas9（CRISPRassociated nucle...

1. 引言在蛋白质谱领域中，胰蛋白酶****，这是因为胰蛋白酶性能**、蛋白中胰蛋白酶裂解位点分布**且所得肽段带强电荷。但是，现有质谱级胰蛋白酶常常无法提供所需的性能。我们发现，这些胰蛋白酶具有非特异性裂解活性，若大量使用，非特异性裂解活性尤为显著。蛋白消化期间自体水解和蛋白水解活性不足所致的蛋白水解抗性位点消化不完全也属于胰蛋白酶的常见缺点。此外，这些胰蛋白酶易受动物源性蛋白污染，且批间...

蛋白质纯化是在实验室中常见的操作，了解不同方法纯化蛋白的原理对于同学们顺利开展实验非常重要，一起来学学纯化蛋白的几种方法吧。一、沉淀法1.盐析：在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来。盐解离产生的离子争夺了溶液中大部分自由水，从而破坏蛋白质的水化作用，引起蛋白质溶解度降低，故从溶液中沉淀出来。而且盐的解离可抑制蛋白质弱电解质的解离，使蛋白质带电荷减少，更容易聚集析出。2...

文章摘要这篇综述全面描述了基于mRNA的治疗方法（图1），包括它们的原理、制造、应用、效果和缺点。同时也介绍了mRNA优化和传递系统在mRNA治疗中的重要性，并进一步讨论了mRNA对抗疾病所要面对的挑战和机遇。全文参考文献近600篇。内容较长，感兴趣的小伙伴，可以直接滑动到对应位置进行阅读：一、mRNA的设计与制造涵盖内容：mRNA的结构成分；mRNA翻译和衰变；mRNA设计；RNA化学式设...

质粒生产工艺流程包括逐级放大的菌体扩增过程和下游纯化过程。细胞与基因治疗中最常用的载体AAV和慢病毒的生产都需要质粒作为起始材料，因此每年需要大量符合质量要求的质粒来满足下游细胞与基因治疗的市场需求。质粒生产工艺中面临的**挑战是大规模的生产放大和纯化，既要维持高超螺旋结构质粒的比例，又要保持高纯度，以上两点无论对于DNA疫苗还是对于下游病毒生产的效率与质量 （如减少空壳率等）形成重大影响。...

什么是流式细胞术？流式细胞术是一种生物学技术，英文：Flow CytoMetry，简称：FCM，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。流式细胞术是对悬液中的单细胞或其他生物粒子,通过检测标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。流式细胞结果图怎么看？FCM 数据的存贮的方式是 FCS2.0（flo...

什么是生物大分子？      生物大分子亦称“生物高分子”，英文名称是：biomacromolecule，是存在于生物体内、分子量一般在一万以上的大分子物质。       生物大分子是生物体的重要组成成份，不但有生物功能，而且分子量较大，其结构也比较复杂。一情况下，每个生物大分子内有几千到几十万个原子，分子量从几万到几百万以上。生物大分子的结构很复杂, 但其基本的结构单元并不复杂。蛋白质分子...

引物二聚体的形成是PCR最常见的问题之一。当引物对之间的一些序列具有同源性时，可以形成引物二聚体。形成引物二聚体的影响如果引物在PCR反应过程中退火形成二聚体，Taq DNA聚合酶可以延伸二聚体以形成比原始引物更长的产物，这可以导致循环中的退火错误。引物二聚体对反应的影响很大程度上取决于反应中使用的化学物质。基于荧光探针的反应受引物二聚体的影响不大，这是因为引物二聚体区域很少出现探针退火断裂...

什么是引物二聚体？引物二聚体，英文是primer dimer，是在PCR反应中, 两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体,引物二聚体形成的原因：常见的引物二聚体形成的原因主要有：引物二聚体形成的原因1. PCR循环次数过高2. PCR退火温度低3. 模板量过低4. 引物浓度过大5. 引物长度过短引物二聚体的形成是在实时荧光定量PCR设计和验证过程中最常见的问题之一。而最根本的原因是由引物之间...

蛋白质结构蛋白质是氨基酸连接成的多肽链。每一种天然蛋白质都有自己特有的空间结构, 这种空间结构称为蛋白质的天然构象。蛋白质是由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质。但是天然蛋白质分子并不是走向随机的松散多肽链。每一种天然蛋白质都有自己特有的空间结构或称三维结构，这种三维结构通常被称为蛋白质的构象，即蛋白质的结构。蛋白质分子中氨基酸的序列和由此形成的立...

蛋白质是由什么组成的?蛋白质包含哪些元素？蛋白质的组成蛋白质protein是一种大分子化合物，它由氨基酸组成。氨基酸是组成蛋白质的基本单位，氨基酸通过脱水缩合连成肽链。构成蛋白质的α-氨基酸按一定顺序结合形成一条多肽链，这些由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链。这些多肽链由于长短和链上排列的千差万别，经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质，再由一条或一条以上的多肽链按照其特定方式结合而...

环介导等温扩增技术LAMP, 英文是Lloop-mediated isothermal amplification，是一种核酸扩增技术，被广泛地应用于病原微生物检测和传染性疾病诊断等领域，具有快速、准确的特点。LAMP扩增反应使用4-6个引物来识别目标DNA中的几个特定的区域。LAMP扩增技术的原理是：DNA在65℃左右可以处于动态平衡状态，在此温度下，利用4条特异性引物，依靠一种链置换DN...

在CRISPR Cas9基因编辑中，gRNA的设计对实验的成功影响很大。CRISPR Cas9蛋白在向导RNA，gRNA的指引下，靶向目的基因，并形成双链DNA断裂DSB。由于DSB的不完全修复而产生插入和缺失indels，引起移码突变，导致终止密码子提前，实现编码基因敲除的目的。但是，很多人在设计gRNA的时候会遇到很多困难。针对一些常见的gRNA设计的问题，美格君就和大家一起讨论。gRN...

在PCR实验中，引物设计非常重要。如何设计引物？今天，美格君就来谈谈引物设计的原则和注意事项。1、**在模板cDNA的保守区间内设计PCR引物。　　DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如Mega、DNAman）进行比对Alignment，各基因相同较多的序列区间就是该基因序列的保守区。2、引物长度**在18-22碱基之间...

CRISPR Cas蛋白系统是细菌和古细菌在长期进化形成的一种免疫防御系统，可用来对抗入侵的病毒或者外源DNA。目前，发现的CRISPR CAS系统根据不同的识别和切割的分子机制被分为了3大类，主要包括单一Cas蛋白、多cas蛋白相互作用、靶向DNA或者RNA等。第1类CRISPR系统需要单一Cas蛋白，包括第II、V、VI型Cas蛋白。而第2类利用多种Cas蛋白，包括第I、III、IV型C...

CRISPR技术是非常好的编辑基因工具，但是需要精心规划才能达到期望的结果。如何更好的使用CRISPR基因编辑技术？CRISPR设计的重要事项和关键**，选择你希望引入的编辑类型，是小的插入缺失InDel？还是特定改变？小的插入缺失InDel最常用于破坏基因的蛋白编码能力，在CRISPR Cas9蛋白酶切割dsDNA后，非同源末端连接NHEJ容易出错的性质往往会引入移码突变。特定改变则是插入...

热敏UDG酶的来源热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白，又称南极热敏UDG。该UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶，产生的缺嘧啶位点，在高温或高 pH 下，极易水解断裂。该酶对RNA无活性，主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热，经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基...

引物稀释的正确方法。在PCR等生物实验中，如何正确的溶解和稀释引物是实验成功的**步。今天美格君就和大家一起分享一下这方面的经验。引物一般分为干粉引物和液体引物。根据引物形态的不同，要采用不同的稀释方法。一．干粉引物溶解稀释方法收到引物后，在打开离心管的盖子之前，为了防开盖时引物干粉散失，在转速为3000-4000转/分钟的转速下离心约1分钟。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如果对实验的重...

什么是BioID邻近蛋白标记技术构建全面的蛋白质相互作用图谱是理解细胞功能的关键。一个特别的挑战是建立图谱不仅考虑到直接的二元蛋白质-蛋白质相互作用，而且还包括间接相互作用的信息（例如，在不直接相互作用的蛋白质之间，但它们都是同一多蛋白复合物的组成部分），以及邻近蛋白质网络。蛋白质相互作用的发现方法还需要考虑许多细胞过程中的动态性质，克服弱蛋白质-蛋白质相互作用带来的技术挑战。利用修饰酶进行...

什么是逆转录PCR?逆转录PCR, 又称反转录PCR，英文Reverse Transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应PCR的一种变形。注意：实时PCR的简称也是RT-PCR, 注意区别。本文所指的RT-PCR是逆转录PCR.在逆转录RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。逆转录PCR（RT-PCR）的原理逆转录PC...

UDG酶与UNG酶有什么不同？在PCR扩增反应中人们经常用UDG酶或者UNG酶来预防污染。许多人经常问UDG酶与UNG酶的区别？为什么一些主混合物包含UNG和其他主混合物包含UDG？为了回答这个问题，美格君首先需要让大家明白，这两者都是用来防止PCR反应的污染情况的，实际目的没有区别。UDG酶，尿嘧啶DNA糖苷酶，是一种进化的、保存完好的DNA修复酶。UDG酶是一个由六个亚家族组成的超级酶家...

UDG酶，英文名称Uracil - DNA Glycocasylase，别名是尿嘧啶-DNA糖基化酶，是人体内的一种酶。UDG酶可自动检验碱基对排列的对错，可以抓取DNA分子链中的碱基对，并用特定形状的“口袋”来进行检查，如果碱基对排列形状正确，则将其放回原来的位置，如果碱基对形状有误，则将其清除，DNA分子链中留下的空白位置会由其他修复机制来修补。Magigen UDG酶用途因PCR扩展技...

逆转录酶又叫做反转录酶，依赖RNA的DNA聚合酶，是一种多功能酶，它有哪些活性和作用呢？逆转录酶的活性和作用：1、具有DNA聚合酶活性，可以RNA为模板，催化脱氧核糖核苷三磷酸聚合成DNA的过程。2、具有DNA指导的DNA聚合酶活性，以反转录合成的**条DNA单链为模板，以脱氧核糖核苷三磷酸为底物，再合成第二条DNA分子3、具有酶催化消化信使RNA的能力。相关阅读Magigen逆转录酶/反转...

基因是什么?基因, 英文Gene，是具有遗传效应的DNA分子片段，是DNA分子上有遗传效应的特定核苷酸序列的总称。基因是遗传变异主要物质，她储存着生命从孕育、生长、凋亡过程的全部信息，通过复制、转录、表达，完成细胞分裂、蛋白质合成等重要生理过程。基因结构是怎样的？Magigen准备从DNA、preRNA、mRNA这三个方面来分析基因的结构：图1. 基因结构图一、DNA基因结构主要是由编码区和...

什么是蛋白质邻近连接分析？邻近连接分析，英文Proximity ligation assay，简称PLA, 中文翻译为邻位连接分析或者邻近连接分析技术。邻近连接分析PLA是一种特殊的免疫分析方法，可用于检测目标蛋白，蛋白相互作用等等。邻近连接分析PLA由Fredriksson等人于2002年开发。到目前为止，它已成为一种成熟且普遍适用的免疫组化工具，用于高级和精确的蛋白质分析。图1.   A...

RNase HII是什么酶？RNase HII, 中文名：核糖核酸酶HII，是2型核糖核酸酶H。RNase HII的作用RNaseHII酶通过切割核糖核苷酸DNA 5'端, 将RNA从RNA-DNA杂交体中裂解。核糖核酸酶HII具有连接核糖核酸酶活性，在RNA-DNA连接处最后一个核糖核酸肽的5'端切割RNA-DNADNA和RNA-DNARNA双链体。要从从DNA中去除错误结合的核糖，RNa...

核酸内切酶RNase H1 / 核糖核酸酶H1RNase H1酶在底物中需要至少四个含有碱基对的核糖核苷酸，并且不能从由脱氧核糖核苷酸组成的链中去除单个核糖核苷酸。因此，在DNA复制过程中，RNase H1酶不参与冈崎片段RNA引物的处理。RNase H1在单细胞生物中不是必需的；在大肠杆菌中，RNase H1敲除得到温度敏感表型，在酿酒酵母，在应激反应中它们产生缺陷。在包括哺乳动物在内的许...

什么是rhPCR?rhPCR, 英文名RNaseH-dependent PCR，中文名称核糖核酸酶H依赖性PCR。rhPCR是对标准PCR技术的改进。在rhPCR中，引物的3'端设计有一个可移动的扩增区。带阻断引物的扩增依赖于耐高温RNase HII酶在与互补靶序列杂交期间的裂解活性。这种核糖核酸酶RNase HII具有一些有用的特性，可以增强PCR。首先，它在低温下几乎没有酶活性，可以在不...