美格生物大讲堂：分子诊断与基因治疗工具逆转录酶/反转录酶/RT酶逆转录酶又称为反转录酶，英文是Reverse Transcriptase，简称RT酶。逆转录酶是RNA指导的DNA聚合酶。是以RNA为模板合成 DNA的酶。逆转录酶是如何发现的？1970年，美国科学家特明(H.M.Temin )和巴尔的摩(D.Baltimore)分别在动物致癌RNA病毒中发现了一种特殊的RNA病毒聚合酶, 该酶...

蛋白提纯是一个一个比较复杂的过程。对于新手来说，可能会遇到一些问题。蛋白提取纯化常见问题1、蛋白纯化标签应该如何选择？在进行蛋白表达时，选择合适的标签有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，因此了解几种常用的蛋白纯化标签很重要。一般来说，常用的蛋白纯化标签主要有His tag、MBP tag、GST tag、Strep tag、NusA tag等。这些蛋白纯化标签之间有什么不同？各有什么优点缺点...

蛋白提取纯化方法蛋白提取和蛋白纯化1、在蛋白质（包括酶）的提取过程中，大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。（1） 蛋白的水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。...

蛋白纯化的步骤蛋白质的分离纯化是一项重要的生物操作技术，蛋白纯化被广泛使用在生物化学研究、药物研制等领域。高效的纯化技术和手段是蛋白质研究的重要基础和关键之一。如何进行蛋白纯化？蛋白提取纯化的步骤程序蛋白分离纯化的一般步骤可以分为前处理、粗分离、精细分离三个部分。图1. 蛋白分离纯化的一般步骤1、预处理预处理分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保持蛋...

CRISPR Cas蛋白家族十分庞大，目前发现和使用的主要有CRISPR Cas9、Cas12、Cas13、Cas14系列。其中，又可以分为多种亚型，例如Cas12a、Cas12b、Cas12f、Cas12i等等。CRISPR Cas9、Cas12a、Cas12b、Cas13、Cas14蛋白之间有什么不同、区别？我们先将这些常用Cas蛋白的主要特点进行比较Crispr蛋白向导RNAPAMTa...

近年来，包括mRNA（信使RNA）、siRNA（小干扰RNA）和miRNA（微小RNA）在内的RNA核糖核酸治疗方法已经得到迅速发展。其中，基于mRNA制备而成的新冠疫苗更是在抗击引起严重急性呼吸道综合症的新型冠状病毒（COVID-19）方面发挥了巨大作用，其超快的序列设计速度和易于大规模生产的特性为应对紧急和不断变化的医疗危机提供了新的可能。如今，在mRNA药物获得成功的大背景下，将线性m...

一、CRISPR体外诊断技术概况什么是CRISPR技术1、CRISPR技术的定义CRISPR的是英文Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats的缩写形式，中文意思是：成簇的规律间隔的短回文重复序列，Cas是英文CRISPR associated的缩写，意思是：CRISPR关联，合在一起简称为CRISPR/Cas系统。Ca...

1. 什么是胰蛋白酶？胰蛋白酶，是蛋白酶的一种，它是从猪、牛、羊的胰脏中提取出来的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后，作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体...

什么是蛋白质纯化？蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛，是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质，一些含量十分丰富，一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质，必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来。如何进行蛋白质纯化？蛋白质纯化是在实验室中常见的操作，纯化蛋白常用的方法有一下几种。一、沉淀法纯化蛋白1.盐析：在蛋白质水溶液中加入中性盐，随...

什么是mRNA?信使RNA（Messenger RNA，mRNA），中文译名“信使核糖核酸” ，是由DNA的一条链作为模板转录而来的、携带遗传信息能指导蛋白质合成的一类单链核糖核酸。1961年，在加州理工学院的一个实验室，科学家首次成功提取到mRNA。 mRNA以细胞中基因为模板，依据碱基互补配对原则转录生成。mRNA就含有与DNA分子中某些功能片段相对应的碱基序列，作为蛋白质生物合成的直接...

质粒生产工艺流程包括逐级放大的菌体扩增过程和下游纯化过程。细胞与基因治疗中最常用的载体AAV和慢病毒的生产都需要质粒作为起始材料，因此每年需要大量符合质量要求的质粒来满足下游细胞与基因治疗的市场需求。质粒生产工艺中面临的**挑战是大规模的生产放大和纯化，既要维持高超螺旋结构质粒的比例，又要保持高纯度，以上两点无论对于DNA疫苗还是对于下游病毒生产的效率与质量 （如减少空壳率等）形成重大影响。...

什么是流式细胞术？流式细胞术是一种生物学技术，英文：Flow CytoMetry，简称：FCM，用于对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。流式细胞术是对悬液中的单细胞或其他生物粒子,通过检测标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。流式细胞结果图怎么看？FCM 数据的存贮的方式是 FCS2.0（flo...

什么是生物大分子？      生物大分子亦称“生物高分子”，英文名称是：biomacromolecule，是存在于生物体内、分子量一般在一万以上的大分子物质。       生物大分子是生物体的重要组成成份，不但有生物功能，而且分子量较大，其结构也比较复杂。一情况下，每个生物大分子内有几千到几十万个原子，分子量从几万到几百万以上。生物大分子的结构很复杂, 但其基本的结构单元并不复杂。蛋白质分子...

引物二聚体的形成是PCR最常见的问题之一。当引物对之间的一些序列具有同源性时，可以形成引物二聚体。形成引物二聚体的影响如果引物在PCR反应过程中退火形成二聚体，Taq DNA聚合酶可以延伸二聚体以形成比原始引物更长的产物，这可以导致循环中的退火错误。引物二聚体对反应的影响很大程度上取决于反应中使用的化学物质。基于荧光探针的反应受引物二聚体的影响不大，这是因为引物二聚体区域很少出现探针退火断裂...

什么是引物二聚体？引物二聚体，英文是primer dimer，是在PCR反应中, 两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体。引物二聚体是在PCR反应中常见的一种非特异性产物，引物二聚体会影响 PCR 的效率和特异性，导致目的片段的扩增受到抑制或失败。引物二聚体形成的原因：常见的引物二聚体形成的原因主要有：引物二聚体形成的原因1. PCR循环次数过高2. PCR退火温度低3. 模板量过低4. 引...

蛋白质结构蛋白质是氨基酸连接成的多肽链。每一种天然蛋白质都有自己特有的空间结构, 这种空间结构称为蛋白质的天然构象。蛋白质是由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质。但是天然蛋白质分子并不是走向随机的松散多肽链。每一种天然蛋白质都有自己特有的空间结构或称三维结构，这种三维结构通常被称为蛋白质的构象，即蛋白质的结构。蛋白质分子中氨基酸的序列和由此形成的立...

蛋白质是由什么组成的?蛋白质包含哪些元素？蛋白质的组成蛋白质protein是一种大分子化合物，它由氨基酸组成。氨基酸是组成蛋白质的基本单位，氨基酸通过脱水缩合连成肽链。构成蛋白质的α-氨基酸按一定顺序结合形成一条多肽链，这些由氨基酸以“脱水缩合”的方式组成的多肽链。这些多肽链由于长短和链上排列的千差万别，经过盘曲折叠形成的具有一定空间结构的物质，再由一条或一条以上的多肽链按照其特定方式结合而...

环介导等温扩增技术LAMP, 英文是Lloop-mediated isothermal amplification，是一种核酸扩增技术，被广泛地应用于病原微生物检测和传染性疾病诊断等领域，具有快速、准确的特点。LAMP扩增反应使用4-6个引物来识别目标DNA中的几个特定的区域。LAMP扩增技术的原理是：DNA在65℃左右可以处于动态平衡状态，在此温度下，利用4条特异性引物，依靠一种链置换DN...

在CRISPR Cas9基因编辑中，gRNA的设计对实验的成功影响很大。CRISPR Cas9蛋白在向导RNA，gRNA的指引下，靶向目的基因，并形成双链DNA断裂DSB。由于DSB的不完全修复而产生插入和缺失indels，引起移码突变，导致终止密码子提前，实现编码基因敲除的目的。但是，很多人在设计gRNA的时候会遇到很多困难。针对一些常见的gRNA设计的问题，美格君就和大家一起讨论。gRN...

在PCR实验中，引物设计非常重要。如何设计引物？今天，美格君就来谈谈引物设计的原则和注意事项。1、**在模板cDNA的保守区间内设计PCR引物。　　DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如Mega、DNAman）进行比对Alignment，各基因相同较多的序列区间就是该基因序列的保守区。2、引物长度**在18-22碱基之间...

CRISPR Cas蛋白系统是细菌和古细菌在长期进化形成的一种免疫防御系统，可用来对抗入侵的病毒或者外源DNA。目前，发现的CRISPR CAS系统根据不同的识别和切割的分子机制被分为了3大类，主要包括单一Cas蛋白、多cas蛋白相互作用、靶向DNA或者RNA等。第1类CRISPR系统需要单一Cas蛋白，包括第II、V、VI型Cas蛋白。而第2类利用多种Cas蛋白，包括第I、III、IV型C...

CRISPR技术是非常好的编辑基因工具，但是需要精心规划才能达到期望的结果。如何更好的使用CRISPR基因编辑技术？CRISPR设计的重要事项和关键**，选择你希望引入的编辑类型，是小的插入缺失InDel？还是特定改变？小的插入缺失InDel最常用于破坏基因的蛋白编码能力，在CRISPR Cas9蛋白酶切割dsDNA后，非同源末端连接NHEJ容易出错的性质往往会引入移码突变。特定改变则是插入...

热敏UDG酶的来源热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白，又称南极热敏UDG。该UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶，产生的缺嘧啶位点，在高温或高 pH 下，极易水解断裂。该酶对RNA无活性，主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热，经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基...

引物稀释的正确方法在PCR等生物实验中，如何正确的溶解和稀释引物是实验成功的**步。今天美格君就和大家一起分享一下这方面的经验。引物一般分为干粉引物和液体引物。根据引物形态的不同，要采用不同的稀释方法。一．干粉引物溶解稀释方法收到引物后，在打开离心管的盖子之前，为了防开盖时引物干粉散失，在转速为3000-4000转/分钟的转速下离心约1分钟。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如果对实验的重复...

什么是BioID邻近蛋白标记技术构建全面的蛋白质相互作用图谱是理解细胞功能的关键。一个特别的挑战是建立图谱不仅考虑到直接的二元蛋白质-蛋白质相互作用，而且还包括间接相互作用的信息（例如，在不直接相互作用的蛋白质之间，但它们都是同一多蛋白复合物的组成部分），以及邻近蛋白质网络。蛋白质相互作用的发现方法还需要考虑许多细胞过程中的动态性质，克服弱蛋白质-蛋白质相互作用带来的技术挑战。利用修饰酶进行...

什么是逆转录PCR?逆转录PCR, 又称反转录PCR，英文Reverse Transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应PCR的一种变形。注意：实时PCR的简称也是RT-PCR, 注意区别。本文所指的RT-PCR是逆转录PCR.在逆转录RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。逆转录PCR(RT-PCR)的原理逆转录PC...

UDG酶与UNG酶有什么不同？在PCR扩增反应中人们经常用UDG酶或者UNG酶来预防污染。许多人经常问UDG酶与UNG酶的区别？为什么一些主混合物包含UNG和其他主混合物包含UDG？为了回答这个问题，美格君首先需要让大家明白，这两者都是用来防止PCR反应的污染情况的，实际目的没有区别。UDG酶，尿嘧啶DNA糖苷酶，是一种进化的、保存完好的DNA修复酶。UDG酶是一个由六个亚家族组成的超级酶家...

UDG酶，英文名称Uracil - DNA Glycocasylase，别名是尿嘧啶-DNA糖基化酶，是人体内的一种酶。UDG酶可自动检验碱基对排列的对错，可以抓取DNA分子链中的碱基对，并用特定形状的“口袋”来进行检查，如果碱基对排列形状正确，则将其放回原来的位置，如果碱基对形状有误，则将其清除，DNA分子链中留下的空白位置会由其他修复机制来修补。Magigen UDG酶用途因PCR扩展技...

逆转录酶又叫做反转录酶，依赖RNA的DNA聚合酶，是一种多功能酶，它有哪些活性和作用呢？逆转录酶的活性和作用：1、具有DNA聚合酶活性，可以RNA为模板，催化脱氧核糖核苷三磷酸聚合成DNA的过程。2、具有DNA指导的DNA聚合酶活性，以反转录合成的**条DNA单链为模板，以脱氧核糖核苷三磷酸为底物，再合成第二条DNA分子3、具有酶催化消化信使RNA的能力。相关阅读Magigen逆转录酶/反转...

基因是什么?基因, 英文Gene，是具有遗传效应的DNA分子片段，是DNA分子上有遗传效应的特定核苷酸序列的总称。基因是遗传变异主要物质，她储存着生命从孕育、生长、凋亡过程的全部信息，通过复制、转录、表达，完成细胞分裂、蛋白质合成等重要生理过程。基因结构是怎样的？基因图详解Magigen准备从DNA、preRNA、mRNA这三个方面来分析基因的结构：图1. 基因结构图一、DNA由图1的基因图...