LAMP扩增技术、CAS蛋白、Taq酶、逆转录酶、RNase HII、基因分型检测

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超灵敏新冠病毒全基因组靶向扩增试剂盒
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超灵敏新冠病毒全基因组靶向扩增试剂盒 
编号: CM006
规格: 20T
储存条件: 液体,存储于-20℃
优惠价格:
24500.00
市场价: 24500.0
购买数量:
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生效日期:2022/3/15   版本号:22V2

超灵敏新冠病毒全基因组靶向扩增试剂盒


【包装规格】20T

【产品编号】CM006020

【预期用途】

无需病毒分离培养,从病例标本、环境样本或培养毒株核酸中靶向扩增新型冠状病毒基因组,结合Illumina或Nanopore高通量测序平台完成病毒基因组测序;实验结果仅供基础研究参考。

检测原理

新冠病毒基因组结构


新冠病毒测序流程


(本试剂盒为逆转录和多重PCR过程)


新冠病毒全基因组靶向测序方案



逆转录、多重PCR




nanopore.jpg
illumina.jpg
Nanopore
illumina (Miniseq/Miseq)
         |         
               |
Nanopore RBK004测序建库试剂盒
Nextera XT DNA Library Prep Kit
          |         
               |
6-8小时完成病毒全基因组测序
24小时完成病毒全基因组测序




测序数据结合IPH-Nano, CLC等软件完成病毒基因组拼接和分析





本试剂盒针对新冠病毒基因组序列设计多重PCR扩增引物,首先对病毒RNA进行逆转录,随后利用多重PCR引物对新冠病毒的全基因组进行靶向扩增。仅需少量RNA即可获得新冠病毒全基因序列,可完美对接二代测序和三代测序平台,结合IPH-Nano测序分析软件轻松获得新冠病毒基因组序列及变异位点信息。


【产品组分


组分名称
规格
数量
储存及运输
RT Mix
80μl
1管
冷冻运输;
-20℃保存;有效期1年。
PCR Mix
1000μl
1管
Primer Pool 1
160μl
1管
Primer Pool 2
160μl
1管
Primer Pool 3
160μl
1管



【适用仪器】

本试剂扩增在ABI、伯乐等普通PCR仪器上进行,反应产物可上二代测序仪和三代测序仪进行建库测序

样本要求

呼吸道标本:鼻咽拭子、深咳痰液、肺泡灌洗液、肺组织活检标本等,以上标本经核酸提取后用于全基因组捕获

实验步骤

逆转录

在 0.2ml PCR 管配制以下反应体系,按以下条件反应


试剂名称

体积

温度
时间

RT Mix

4μL

25℃
10min

Viral RNA

16μL

50
10min

Total

20μL

85

5min



4℃

hold



2. PCR 扩增

在 0.2ml PCR 管配制以下反应体系,轻弹试管混合,瞬时离心,按以下反应条件


试剂名称
体积
温度
时间
循环数
PCR Mix
12.5μL
98℃
30s
1
Primer Pool 1/2/3
4μL
98℃
15s
20-35
Nuclease-free water
6μL
65℃
5min
Template cDNA
2.5μL
4℃
1
Total
25μL







2PCR 循环数


CT
Illumina 建库
Nanopore 建库
<20
20
25
20-28
25
30
>28
28
35




注意事项

实验结果仅供基础研究参考

检测结果与样本的收集、保存、处理及RNA 提取密切相关, 请妥善进行该过程;

请谨慎处理样本,防止感染;

临床实验室应该严格按照《临床基因扩增实验室工作规范》中的要求配备设备及操作人员,应严格按照说明书要求进行操作。


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