Cas12a(又称 Cpf1),属于 2 类 V 型 CRISPR 效应蛋白,是在单链向导RNA 引导下与靶DNA 特定位点结合并切割的核酸内切酶,目前已经广泛应用于微生物、植物和动物的基因编辑中,并在分子诊断方面具有非常大的应用前景。Cas12a 识别并切割靶标双链 DNA(反应底物)的同时,其高效切割任意序列链 DNA(ssDNA)的活性被激活。通过设计两端带荧光标记或其他小分子标记的探针,实现 CRISPR/Cas12a 对DNA 检测的信号放大,常用的检测方法包括实时荧光法和胶体金法。由于 gRNA 特异性识别靶区域,CRISPR/Cas12a 系统相当于对待分析的 DNA 或 DNA 扩增产物进行了『二次筛选』,因此具有较高的特异性。