分子检测试剂盒

一步法RT-qPCR试剂盒

美格一步法RT-qPCR预混液试剂盒-协助实现对新冠病毒等病原体的快速检测

【产品编号】A014M

【产品名称】Magigen一步法 RT-qPCR 预混液 II

【包装规格】1000T

【产品内容】

产品组成                                     体积       

2× Reaction Buffer 3^a             12.5 ml

RT-qPCR Enzyme Mix II^b         1 ml

a. 包含 dNTPs、Mg2+等；

b. 包含 MMLV Reverse Transciptase、RNase

Inhibitor 以及 Hotstart Taq DNA Polymerase。

【Magigen RT-qPCR用途】

用于以 RNA 为模板的探针法定量 PCR 检测，推荐检测模板为样本提取的核酸。美格一步法RT-qPCR预混液使得一步完成新冠病毒等病原体检测与基因表达工作流程成为可能。

【RT-qPCR检测原理】

本产品整合 Real Time RT-PCR 的反转录酶（MMLV Reverse Transciptase ） 和 抗体修饰的热启动酶（ Hotstart Taq DNAPolymerase），配合经过优化的缓冲体系，使用基因特异性引物（GSP）在单管中完成逆转录和 qPCR反应，不需要额外的开管/移液操作，不需要额外的操作，操作简单，降低污染风险。

【储存条件及有效期】

-20℃保存，有效期 12 个月。

【适用仪器】

SLAN 系列、MA6000 等国产荧光定量 PCR 仪；AB 系列、ROCHE 系列等荧光定量 PCR 仪。

RT-qPCR如何操作

【RT-qPCR检验步骤】

以 SLAN-96P 为例

1. 在 RNase-free 离心管中配制反应混合液：

组分                                          体积(μL)

2× Reaction Buffer 3              12.5

RT-qPCR Enzyme Mix II          1

Foward Primer(10μM)             0.5

Reverse Primer(10μM)            0.5

Probe(10μM)                          0.25

模板 RNA                                2

RNase-free Water                  Up to 25

a. 反应体系中引物、探针以及模板用量可自行调整，体系不足用 RNase-free Water 补齐；

b. 反应体系用量可根据如下原则进行调整：

1）反应体系中引物浓度在 0.2μM 即可有较好的扩增，扩增性能较差时，可在 0.1~1.0μM 进行调整；

2）探针浓度可在 50~250nM 进行调整。

2. 按照如下条件进行 One step RT-qPCR 反应：

步骤     温度     时间      循环数

1          50℃     15min   1

2          95℃     2.5min   1

3          95℃     15s        45

4          60℃     30s

a. 延伸时间根据 Real Time PCR 仪所需的数据采集最短时间进行调整。

【RT-qPCR注意事项】

1. 本产品仅供科研使用，使用前请仔细阅读本说明书。

2. 2× Reaction Buffer 3 使用前，待解冻后充分混匀并短暂离心；RT-qPCR Enzyme Mix II 使用前可短暂混匀并离心，准确吸取；

3. 请严格按照基因扩增实验室的管理规范进行实验操作，反应液的配制需使用RNase-free的枪头、反应管等，注意防止扩增产物污染。

4. 实验结束后，检测过程中所产生的废弃物应按照相关规范进行处理

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